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HaloTag® Vectors for E. coli and Cell-Free Protein Expression 这些载体用于在大肠杆菌和无细胞表达系统中通过 T7 RNA 聚合酶启动子进行 HaloTag® 融合蛋白的诱导表达。表达水平高度依赖于蛋白质的特性,但是一般 N- 末端 HaloTag® 融合蛋白(如 pFN18A/ K,Cat.# G2751,G2681)可以提高表达水平、增强复性,并提高所表达蛋白的溶解度。有两种类型的HaloTag® 载体:应用传统克隆方法的多克隆位点(MCS)载体和 Flexi® 系统载体。
Flexi® 载体系统是一种简单的蛋白编码序列的定向克隆方法。该方法建立在两种位点稀有的限制性酶 Sgfl 和 Pmel 基础上,可以将蛋白编码区在不同的Flexi® 载体之间转换,而不需要重新测序,该方法快速、有效、保真度高。只有两个 N- 末端标记的载体或者从 N- 末端到 C- 末端的载体可以发生直接转化,多克隆位点载体和几个 Flexi® 系统载体一个 His6-HaloTag® 双重标签。这种双标签能够使用重复利用的镍树脂进行蛋白质纯化,保留了 HaloTag® 共价标记属性。
pH6HTN His6HaloTag® T7 Vector G7971
pF1A T7 Flexi® Vector C8441
pFN18A HaloTag® T7 Flexi® Vector G2751
pFN18K HaloTag® T7 Flexi® Vector G2681